金黃色葡萄球菌測試片
1、原理及適用范圍
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus 簡稱金葡菌)是人類最常見的致病菌之一,其侵襲力很強(qiáng),能產(chǎn)生多種致病物質(zhì)如:腸毒素、凝固酶等;可引起化膿性炎癥、毒素性疾病及葡萄球菌性腸炎。金葡菌所引起的中毒事件已成為世界性的公共衛(wèi)生問題,我國每年由金葡菌引起的食物中毒事件屢有報(bào)道。金黃色葡萄球菌測試(FilmplateTM Staphylococcus aureus BT206) 含有選擇性培養(yǎng)基和專一性的酶顯色劑,運(yùn)用微生物測試片專有技術(shù),做成一次性快速檢驗(yàn)產(chǎn)品,一步培養(yǎng)15~24h就可確認(rèn)是否有病原菌的存在,大大地簡化了檢測程序。本產(chǎn)品適用于各類生、熟食制品,飲料,糕點(diǎn)類,調(diào)味品,奶制品等的快速檢測。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn):食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物檢驗(yàn)黃色葡萄球菌檢驗(yàn)(GB/T 4789.10-2010)。
2、操作方法
2.1、樣品處理:取樣品25mL(g)放入含有225mL滅菌磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi),制成1:10的樣品勻液,調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.0~8.0。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL,注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi),振搖后成為1:100的樣品勻液,以此類推,每次換一支吸管。
2.2、接種:一般食品選2~3個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測,將金黃色葡萄球菌測試片(BT206)置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上,然后再將上層膜緩慢蓋下,靜置10s左右,使培養(yǎng)基凝固,每個(gè)稀釋度接種兩片。做一片空白陰性對照。
2.3、培養(yǎng):將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃,培養(yǎng)15~24h。
3、結(jié)果判讀
培養(yǎng)后,測試片上紫紅色的菌落為金黃色葡萄球菌;呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群。出現(xiàn)陽性菌落的樣本,最好用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證,沒有條件的至少要再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。

4、計(jì)數(shù)原則及報(bào)告方式
4.1、選擇菌落數(shù)在20~200個(gè)之間的紙片進(jìn)行計(jì)數(shù)。
4.2、若兩個(gè)稀釋度的菌落數(shù)均在20~200之間,則取其平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù),即為每毫升(或每克)樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)。
4.3、如果所有稀釋度的測試片上的菌落數(shù)都小于20,則計(jì)數(shù)稀釋度最低的測試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之;如果所有稀釋度的測試片上均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。
4.4、如果所有稀釋度的菌落數(shù)都大于200,計(jì)數(shù)最高稀釋度的測試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。計(jì)數(shù)菌落數(shù)大于200的測試片時(shí),也可計(jì)數(shù)一個(gè)或兩個(gè)具有代表性的方格內(nèi)的菌落數(shù),換算成單個(gè)方格內(nèi)的菌落數(shù)后乘以20(濾紙區(qū)面積為20cm2),即為測試片上估算的菌落數(shù)。報(bào)告單位以CFU/mL(或CFU/g)表示。
5、附加說明
5.1、本產(chǎn)品對于提高衛(wèi)生行政監(jiān)督部門應(yīng)對細(xì)菌性食物中毒等突發(fā)性公共衛(wèi)生事件的能力,具有重要的作用。
5.2、山東省疾病預(yù)防控制中心的驗(yàn)證結(jié)果表明,當(dāng)金黃色葡萄球菌在0~9個(gè)菌落范圍內(nèi)時(shí),測試片與血平板均能檢出,作為致病菌不得檢出的標(biāo)準(zhǔn)要求,可以作為金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)應(yīng)用。
5.3、經(jīng)試驗(yàn),該測試片的檢測靈敏度高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好。對純菌的檢測下限可達(dá)3cfu/mL,與營養(yǎng)瓊脂計(jì)數(shù)、Baird-Parker培養(yǎng)計(jì)數(shù)和顯色培養(yǎng)基計(jì)數(shù)比較,檢測結(jié)果均無顯著差異。(食品研究與開發(fā)2009,30(1):94-97)
5.4、注意使用過的測試片上帶有活菌,需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。
6、保存條件
本產(chǎn)品需存放在4℃~10℃冰箱中,保質(zhì)期為一年,鋁箔袋打開后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好,放到冰箱中,一個(gè)月內(nèi)用完。在高濕度的環(huán)境中可能出現(xiàn)冷凝水,最好在拆封前將整包回溫至室溫。